高山红景天甙对阿霉素肾病大鼠MMP 、TGF及IL的影响

　　肾小球疾病主要侵犯双肾肾小球，是引起慢性肾衰（尿毒症）的主要疾病［1］。目前多数认为起病为免疫失调，循环免疫复合物沉积及原位免疫复合物形成产生炎症而致病［1］。高山红景天是长白山地区珍稀药物植物，抗炎、抗脂质过氧化、增强SOD活性、清除自由基、双向调节机体的免疫力［2，3］。喂服红景天可降低阿霉素大鼠尿蛋白及血脂［4］，红景天制剂对肾炎有治疗作用［5］ 。本试验探讨高山红景天能否干预细胞外基质降解而延缓肾小球硬化。

　　1  材料与方法

　　1.1  主要材料

　　1.1.1  动物  30只Wistar雌性大鼠，体重180～200g/只，购自吉林大学动物部。

　　1.1.2  高山红景天甙  吉大二院肾内研究室提取。

　　1.1.3  阿霉素  由深圳万乐药业有限公司生产。

　　1.1.4  蛋白酶试剂盒  购自上海森雄科技实业有限公司。

　　1.1.5  ELX800酶标仪、CL-5000超低温冰箱  日本产。

　　1.1.6  日立生化分析仪  日本产。

　　1.2  实验方法

　　1.2.1  肾炎模型建立  参照鲁斌等［6］阿霉素肾病模型的制作方法。分3次大鼠尾静脉注射阿霉素，间隔7天先后按3mg/kg、2mg/kg、2mg/kg体重给药，第21天后留取尿液，查24h尿蛋白定量。

　　1.2.2  动物分组  随机将30只大鼠分为：（1）正常组（n=10）；（2）模型组（n=10）：制作模型成功后，未给予药物治疗；（3）治疗组（n=10）：模型成功后，每日给予红景天甙液1.5ml（相当于生药20g/kg体重），连续灌胃28天。

　　1.2.3  观察指标与方法  于治疗前及完成后，以代谢笼收集各组大鼠24h尿液，磺基水杨酸比浊法测定尿蛋白含量，用ELISA方法分别检测各组血清MMP-2 、MMP-9、TGF-β1、IL-10、IL-2的含量，并测肝功、肾功、血胆固醇。

　　1.2.4  统计学方法  对各组结果进行组间t检验，结果以均数土标准差（x±s）表示，P<0.05为有统计学差异。

　　2  结果

　　2.1  尿蛋白含量（mg/24h）变化测定结果  见表1。表1  尿蛋白含量（mg/24h)变化测定  （略）注：与正常组相比*P<0.01

　　治疗后大鼠尿蛋白含量降低（P<0.01），未达到正常组的水平，而模型组的尿蛋白仍有增加，但P>0.05。

　　2.2  经红景天治疗后肾炎大鼠血生化指标变化  见表2。 表2  红景天治疗后肾炎大鼠血生化指标变化  （略）注：与正常组相比ΔP>0.05，与正常组相比※P<0.05、与模型组相比☆P<0.05

　　治疗后肾炎大鼠血谷丙转氨酶、谷草转氨酶及肌酐变化不明显，血白蛋白回升（P<0.05）、胆固醇也有所下降（P<0.05），未达到正常。

　　2.3  高山红景天治疗后各组血清MMP-2、MMP-9、TGF-β1、IL-10、IL-2  见表3。表3  高山红景天治疗后各组血清值比较  （略）注：P1治疗组与正常组相比；P2为治疗组与模型组相比。▼为与以往报道不符较正常低。※为模型组与正常组比

　　MMP-2模型组较正常组明显增加P<0.05；MMP-9模型组较正常组明显减少P<0.05，治疗组均较模型组明显增加并超过正常组（P<0.05）。TGF-β1模型组较正常组增加P<0.05；治疗组较模型组明显下降（P<0.05），较正常组也低且P<0.05。IL-10模型组较正常组降低P<0.05，治疗组较模型组明显增加（P<0.05），并高于正常组。IL-2治疗后降低但P>0.05。

　　3  讨论

　　治疗后尿蛋白下降（P<0.01），治疗有效，未达到正常组水平，可能单用红景天甙肾炎未完全缓解，需合用其他药物，也可能疗程不够。阿霉素制作的急性肾病模型类似于人类微小病变表现，而慢性肾病模型类似于人类慢性肾炎或局灶节段性肾小球硬化［6］。近年来认为ADR大鼠肾病模型是自由基产生，脂质过氧化物形成，造成肾小球电荷障损害和分子控制缺乏，肾小球通透性改变和肾小管重吸收障碍［7］，尿蛋白下降可能与抗自由基、调节免疫及抗炎作用有关，阻止肾小球滤过膜涎蛋白破坏，维持电荷屏障的完整性，减少尿蛋白的滤出。

　　基质金属蛋白酶类（MMPs）分五类，MMP-2、 MMP-9属明胶酶类，主要降解ECM的主要成分之一Ⅳ型胶原［4，8］，转化生长因子β1（TGF-β1）增加基质的产生、抑制降解［9］，可能是上调PAI-1的表达，抑制纤溶酶及MMPs ［3］。肾小球疾病进展的重要病理基础是肾小球细胞外基质（ECM）积聚［10］，主要原因是ECM合成与降解的失衡［11］。MMP增加、TGF-β1下降，提示促进ECM降解，延缓肾小球硬化。模型组MMP-9含量降低与文献报道不符，在肾炎进展时，MMP早期代偿性增加以促进ECM降解［12］。原因考虑病情重发病早期即代偿能力低下，MMP-9未能升高。

　　致炎性与抗炎性细胞因子在肾小球疾病中也发挥重要作用。抗炎性因子如 IL-4、IL-6、IL-10、IL-13等可拮抗致炎性因子IL-1、IL-2、TNF等的产生及致炎作用，影响肾脏炎症性疾病［12］。近年报道IL-10有利于缓解纤维化［13］；肾病及肾炎活动期血清及尿液ｓIL-２Ｒ浓度分别高于缓解期，IL-２促进上皮细胞合成含硫化合物和蛋白质［12］，IL-２加速肾炎进展。IL-10模型组较正常组降低（P<0.05），治疗组较模型组明显增加（P<0.05），并高于正常组。支持红景天治疗肾炎有效。IL-2各组比较P>0.05，但有降低趋势，支持红景天疗效。

　　同时高山红景天甙对肾炎大鼠及正常大鼠的肝功能、肾功能无明显影响；而且治疗后的大鼠血胆固醇有所下降（P<0.05），血浆白蛋白有所上升（P<0.05）。

　　综上所述，研究结果表明，高山红景天甙对肾小球肾炎具有明显的治疗作用，通过调节合成、降解酶及干预细胞因子影响ECM降解，延缓肾小球硬化；并且无明显毒副作用。此研究不仅为肾小球肾炎的治疗提供了一种新途径，同时也为高山红景天甙的开发及应用于临床提供了理论依据。

　　【参考文献】

　　1  叶任高，陆再英.内科学，第五版.北京：人民卫生出版社，2001，518-519.

　　2  吴维春.高山红景天.长春：吉林科学技术出版社，1987，45-57.

　　3  林文生，张农，张颂文，等.反义转化生长因子β1基因转染大鼠肾系膜细胞及其对纤溶酶原激活物抑制剂1和基质金属蛋白酶家族表达的影响.中华病理学杂志， 2000，29(4): 284-285.

　　4  Borkakoti N. Matrix metalloproteinase:Variations on a theme.Prog Biophys Mol Biol， 1998，70(1):73-74.

　　5  孙波，徐君东，闫国强，等.红景天对阿霉素大鼠尿蛋白、血脂的影响.中医药学报，2001，29(1):43-45.

　　6  鲁斌，李新民，马融.对改良的阿霉素肾病模型的评价.实验动物科学与管理，1999，16（3）：5.

　　7  张秋枫，郑荣秀，田迎春.对改良的阿霉素肾病模型的评价，现代康复，1998，2（6）：251-253

　　8  MassovaL.FASEBJ， 1998，12(12):1075-1095.

　　9  王伟铭，姚建，石蓉，等.TGF-β1对肾间质成纤维细胞Ⅲ型胶原表达的影响.细胞与分子免学杂志，2000，16(1): 29-31.

　　10  秦蓉.PAI-1及其在肾小球硬化中的作用及意义.临床与实验病理学杂志，1998，14（6）：579.

　　11  Vssalli JD，Sappino AP，Belin D.The plasminogen activator/plasmin system.J Clin Invest，1991，88:1067

　　12  汤颤，袁发焕.金属蛋白酶组织抑制因子-1、基质金属蛋白酶－9的表达与肾脏纤维化的关系.中国现代医学杂志， 2002，12(2): 284-285.